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若不知如何恰當地溶解您的樣品,尤其是如何溶解疏水性的多肽,往往會給您的實驗開展帶來困難。測定多肽最佳溶解條件,對樣品的消耗是不可避免的,若消耗過多,可能造成剩余的關鍵多肽樣品不足以完成您的后續實驗。


強耀生物提供溶解度測試服務,可以幫您更加從客地應對疏水性多肽。您將不需再通過額外實驗估測樣品的溶解性質,由我們來為您提供完整的、暈身定制的多肽溶解特性報告,專門為您解決多肽溶解性質的疑問。

合適的多肽溶解多肽分析實驗成功的重要因素。多肽溶解不當或溶解不充分會導致多肽濃度計算不準確,并可能會引起實驗誤差,或者導致實驗失敗。


建議先用少量肽來試驗最適溶解方法,只有當多肽完全溶解后,才能加入溶液并將之稀釋至最終濃度。即先溶解,后加入緩沖液。注意,總是將多肽加入到適當溶劑中攪拌,而不能采用其它方式。

凍干多肽的保存

所有標明"保持凍干"的產物,都必須保存在冰凍條件下,最好-20℃,若保存在-80℃以下,大多數肽可維持幾年的活性。


當使用冰凍產品時,開蓋之前,瓶或試管應在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內升至室溫。對于保存于-20°C的產品,這個過程需要一小時或更長,隨包裝大小而異。否則,當瓶打開時,水氣進入導致多肽凝縮而降低其穩定性。一旦打開,應迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,尤其親水肽更應注意。

多肽溶液的保存
多肽溶液比干粉的穩定性差很多,為了得到最好結果,遵循下列原則:

反復凍融有損于肽的活性,所以建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少,用后剩余者棄掉。
溶于PH5-7無菌的緩沖液中,貯存于-20°℃。
包含Cys、Met、Trp、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此須保存在無氧化劑的環境中。
由于細菌能降解多肽,因此貯存前必須過濾除菌。
Q
多肽合成的基本原理是什么?
多肽固相合成法是多肽合成化學的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產物,合成過程可以連續進行,進而為多肽合成的自動化奠定了基礎。目前全自動多肽合成,基本都是固相合成。
Q
多肽如何溶解以達到最大溶解濃度?
溶解多肽是非常復雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗,在沒有確定合適的溶劑前千萬不要全部溶解。 對于常規溶解,有如下幾條建議: (1)超聲波可以增加多肽的溶解性; (2)10%的乙酸有助于溶解堿性多肽; (3)10%的碳酸氫銨有助于溶解酸性多肽; 對于在水溶液中溶解度極低的多肽,應先嘗試用有機溶劑(例如DMSO,異丙醇,甲醇,乙腈)溶解,一旦多肽全部溶解,逐漸加水稀釋到指定濃度。
Q
如何定義多肽的純度?
多肽的純度通常是通過HPLC,用每分鐘1%的標準乙腈梯度來檢測決定的。合成過程中,氨基酸之間的交聯效率不是總能達到100%,因而產生一系列的氨基酸缺失的雜質。大多數這樣的氨基酸缺失的雜質在純化過程中都被去掉了,但有少數的雜質其色譜表現與目標多肽很相近。這些氨基酸缺失的雜質肽留在了多肽樣品中就構成了余下的幾個百分點。
Q
如何對合成的多肽進行質檢?
通常以質譜法測定肽的分子量來確定產品是否正確,MS檢測結果還可顯示大部份的主要雜質。如果必要,還可提供肽凈含量檢測,如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實多肽的氨基酸組成,他們均可作為多肽確認的補充方法。
Q
為什么有些多肽的合成產率或純度會比較低?
多肽合成與引子合成有比較大的區別,不能合成的引子很少,但是不能合成的多肽經常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重復時,多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。
Q
做免疫用的多肽多長合適?
一般約10-15個氨基酸,當然長一些免疫效果好一些,不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上,效果較好。另外,10aa以下的多肽免疫效果比較差。
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